Que Hacer Cuando mi HPLC no Colabora. Parte 1.

El amigo HPLC se ha vuelto quizá no en un indispensable pero si en una poderosa herramienta a la hora de trabajar en síntesis de productos nuevos. El poder de resolución y la fidelidad de los datos que nos otorga son de una ayuda invalorable en ciertas situaciones.
Sin embargo, es un equipo que por robusto que sea, tiene sus mañas y necesita ser tratado no tanto con cariño mas si con respeto. Esta situación se agrava más, cuando tenemos un equipo que es utilizado por muchísimas manos (no confundir con el que tiene cada uno en la mesita de luz). No es extraño que el último que lo usó no limpie correctamente el equipo, o simplemente no anote en que condiciones lo utilizó, lo que puede llevar a incompatibilidad de solventes o a la tan temida “precipitación de un Buffer”. Sin embargo aún ante las buenas costumbres del uso de estos equipos nos podemos encontrar ante estas situaciones.
Por eso es bueno saber como poder proceder en este tipo de situaciones. Mi problema, “se tapó el equipo”.
Lo primero es como en los incendios, persecuciones de masas y estampidas de caribúes, no entrar en pánico. Recordar la primicia básica del HPLC, es un equipo robusto. Lo segundo es pensar, en general la mayor cantidad de las aplicaciones del HPLC son en Fase Reversa, por consiguiente estamos usando solventes que son miscibles con Agua y considerando que tenemos chance de tener alguna solución salina en la vuelta, se debe tratar de limpiar con agua, aunque en los manuales de Shimadzu decía que en general la mezcla de Agua:Metanol 1:1 es capaz de disolver la mayor parte de los buffer de uso común o sea que entre esas proporciones estamos bien. Ahora si dudamos de que pueda haber un solvente no miscible con agua, se puede usar el comodín que nos saca de todos los apuros, el isopropanol, que es miscible con prácticamente todos los solventes de uso en HPLC tanto de Fase Normal como Reversa. Lo siguiente sería determinar donde se encuentra la obstrucción. Para eso lo que se hace normalmente es comenzar a desarmar el equipo, lo cual es más sencillo de lo que suena. Simplemente se van desconectando las cañerías desde el desagüe hasta la bomba de una en una (no olvidar volver a conectarlas luego de testear, porque como decía Murphy siempre que tengas que volver a armar algo que desarmaste te van a sobrar tornillos). Se desconecta una sección y se hace bombear, cuando se llega a un punto en el que bombea pues la obstrucción esta en el siguiente tramo. Si se ha tapado una cañería en general se puede sustituir fácilmente si es de PEEK pero no tan fácil si es de acero. Para probar destaparla la mejor opción es simplemente subir la presión máxima a un valor alto y bombear el solvente con el que se va a lavar con un flujo alto. En general esto puede liberar estas obstrucciones.
Otra opción sería que tenemos la columna tapada. Las columnas en general son un tema más delicado y depende muchísimo del tipo de columna que estamos usando, aunque una cosa que es fácil y rápida si tenemos dudas de que una columna se tapó es invertirla y bombearla en sentido opuesto, como la obstrucción esta en general en la placa del inicio es factible que se pueda eliminar de esta forma (funciona bien para buffers que precipitaron si es que no precipitó mucho dentro de la columna).
En el caso de que la bomba directamente no este bombeando (un dato maravilloso para darse cuenta de esto es que a diferencia de una obstrucción posterior donde se eleva la presión, en general en estas no se levanta presión o no se mantiene estable) puede deberse a un bloqueo de las válvulas ya sea de entrada o de salida. Lo mejor en estos casos es desarmarlas y sonicarlas un rato en isopropanol como para que aflojen lo que puedan tener.

Bueno, esto es todo de cómo destapar tu HPLC, si nada de eso funciona llamar al service o dale con la sopapa. Agradecemos los aportes de Pablito Mendina por las enseñanzas y a la Dra. Sonia G. Mahler por darme la idea.
Saludos


Gracias Guille